"Ako všetci vieme, PCR je základná experimentálna metóda v biochemických laboratóriách." Experimentálne výsledky sú vždy neuspokojivé, čo môže byť spôsobené miernou kontamináciou plastového spotrebného materiálu PCR alebo experimentálnou interferenciou spôsobenou zavedením inhibítorov. Existuje ešte jeden veľmi dôležitý dôvod: Na výsledky experimentu bude mať veľký vplyv aj nesprávny výber spotrebného materiálu.
Existuje mnoho dôvodov, ktoré ovplyvňujú výsledky experimentov PCR: zvyčajne existuje nasledujúcich 7 druhov.
1. Priméry: Priméry sú kľúčom k špecifickej reakcii PCR a špecifickosť produktov PCR závisí od stupňa komplementarity medzi primérmi a templátovou DNA;
2. Enzým a jeho koncentrácia;
3. Kvalita a koncentrácia dNTP;
4. templátová (cieľový gén) nukleová kyselina;
5. koncentrácia Mg2+;
6. Nastavenie teploty a času;
7. Počet cyklov;
8. Vybavenie, spotrebný materiál atď.
Spomedzi mnohých ovplyvňujúcich faktorov je spotrebný materiál jedným z veľmi dôležitých a ľahko prehliadnuteľných faktorov.
Existuje mnoho druhov
PCR spotrebný materiál: 8 skúmaviek, skúmavky s malým objemom, štandardné skúmavky, bez obruby, s poloobrubou, s plnou obrubou a séria PCR a qPCR doštičiek. Je veľmi ťažké si vybrať a existuje veľa bežných problémov, poďme sa pozrieť na problémy, ktoré si vyberie každý
PCR spotrebný materiál, a ako ich vyriešiť?
Prečo sú
PCR spotrebný materiálvšeobecne z PP?
Odpoveď: Spotrebný materiál PCR/qPCR je vo všeobecnosti vyrobený z polypropylénu (PP), pretože ide o biologicky inertný materiál, povrch nie je ľahko priľnavý k biomolekulám a má dobrú chemickú odolnosť a teplotnú toleranciu (možno autoklávovať pri 121 stupňoch) baktérie a tiež odoláva teplotným zmenám počas tepelných cyklov). Tieto materiály sú zvyčajne v priamom kontakte s činidlami alebo vzorkami, takže počas procesu výroby a prípravy je potrebné zvoliť vysokokvalitné materiály a dobré techniky spracovania.